VIRUS DEL PAPILOMA HUMANO EN CARCINOMA DE PULMON

OBJETIVOS: En este estudio se busca la identificacion mediante la amplificacion del gen VPH-16 en casos de carcinoma queratinizante de pulmon.

MUESTRAS:42000 biopsias aproximadamente. Fuerona revisados 25 tumores de CEP para la seleccion de 15 casos queratinizantes, los cuales correspondian a 13 pacientes analizados.

9 varones y 4 mujeres

y su edad promedio de 64.1 años

EXTRACCION DE DNA: MUESTRAS TRATADAS CON XILOL Y ETANOL

Lisis: proteinasa k , y centrifugo a 15000 rpm por 10 minutos, se incubo durante 48 horas  a 56º C para extraes el DNA. Agitacion mediante vortex durante 30 segundos, se centrigugo el sobrenadante fue re purificado mediante el sistema Glassmax se incubó durante 48 horas a 56° C para extraer el DNA. Agitación mediante vórtex durante 30 segundos, se centrifugó y el sobrenadante fue re purificado mediante el sistema Glassmax. Finalmente se obtuvieron 50 ul de DNA  para las reacciones de amplificación genómica.

DEBIDO A QUE SE BUSCABA LOS GENES ESPECIFICOS VPH 16 Y 18  DUE UN PCR MULTIPLEX

D: 30s a 95ºC      H: 30s a 56ºC     E: 30s a 72ºC A las mismas condiciones ambos segmentos

CONTROLES: Betaglobina humana como control  positivo interno

Como control positivo externo se utilizó la línea celular SiHa que lleva incorporado genomas de VPH 16 y la línea celular HeLa, que incorpora genomas de VPH 18

RESULTADOS:

Se identifico la presencia de VPH genérico en 6 (42,2%) de 13 casos amplificables. De estos casos todos correspondieron al genotipo VPH 16 y ninguno correspondió al genotipo VPH 18. La presencia de VPH 16 en la serie analizada indicaría que VPH puede tener algún rol en cáncer pulmonar del tipo escamoso - queratinizante.

muestra un ejemplo de dos casos de CEPQ, uno positivo para VPH 16 y otro negativo. Se muestran además los controles positivos para VPH 16 y 18 que corresponden a productos de amplificación de DNA de células SiHa y HeLa junto con patrón de peso molecular.

Figura 1. Detección de VPH en muestras de Carcinoma escamoso queratinizante de pulmón. M: peso molecular; 1-3: Controles positivos. 1: VPH genérico (SiHa); 2: VPH 16 (SiHa); 3: VPH 18 (HeLa); 4-11: casos clínicos 2 y 3. 4 y 8: betaglobina humana;5 y 9: VPH genérico; 6 y 10: VPH 16; 7 y 11: VPH 18.

BIBLIOGRAFIA :
http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0717-73482002000200002